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GeneQuence® Changera Votre Expérience du Laboratoire


Figure 1.


Figure 2.

GeneQuence utilise une nouvelle technologie d´hybridation ADN pour tester la présence de Salmonella, Listeria spp., Listeria monocytogenes, et Campylobacter. Chaque kit d´analyse utilise deux éléments d´ADN spécifiques, garantissant une spécificité maximale et l'assurance de résultats rapides. Chaque kit a été conçu pour détecter 1-5 CFU/25g d´échantillon en moins de 2 heures. En associant cette technologie simple d´utilisation à un automate, il est possible de tester plus de 450 échantillons en une journée de 8 heures avec un minimum d´interventions manuelles. Si vous êtes décidé(e) à simplifier votre programme d'analyse des pathogènes, contactez-nous!

Récapitulatif de Protocole

Tout d´abord, une portion de la culture d´enrichissement est placée dans un tube à essai. Un réactif de lyse est ajouté, détruisant la paroi cellulaire et libérant les molécules d´acide nucléique ciblées. Une portion de l´échantillon lysé est ensuite transférée dans un micropuits et les réactifs de détection (sondes nucléiques) sont ajoutés. (Figure 1.)

Les sondes nucléiques comprennent : 1) une sonde oligonucléotidique de capture, spécifique à une séquence d´ARNr de l´organisme recherché et marquée d´une queue Poly dA à son extrémité 3´; et 2) une sonde oligonucléotidique de détection, également spécifique à une séquence d´ARNr de l´organisme recherché, et marquée à son extrémité 5´ avec l´enzyme horseradish peroxydase (HRP). La réaction d´hybridation se poursuit alors pendant une heure. Si l´ARNr cible est présent dans l´échantillon, les deux sondes s´hybrideront avec leurs séquences complémentaires sur la molécule cible.

Le complexe résultant est capturé sur la face interne du micropuits recouverte d´acide polydésoxythymidylique (poly dT), complémentaire à la queue poly dA de la sonde de capture. Toute sonde non liée est ensuite éliminée par lavage, et le substrat HRP est ajouté.

Après une courte incubation, une couleur bleue indique la présence de la sonde de détection hybridée dans le complexe, et donc la présence d´ARNr de l´organisme recherché. La solution d´arrêt est ajoutée, faisant virer la couleur du bleu au jaune, et les résultats sont déterminés par spectrophotométrie à 450 nm. Une valeur d´absorbance supérieure à un seuil prédéterminé indique un résultat de test positif. (Figure 2.)

L´avantage GeneQuence

Comparatif: GeneQuence et Tests PCR

Point de Comparaison GeneQuence PCR Les avantages de GeneQuence
Durée du dosage 1h50 3h30 (en moyenne) Résultats plus rapides. Économie d´au moins 25% par rapport aux méthodes PCR en termes de temps de travail hors ligne (réglage de l´instrument, ajout manuel des réactifs, etc.).
Matrices Bonne performance sur l´ensemble des produits alimentaires Des difficultés avec certains types de produits alimentaires Des publications font état de problèmes avec la PCR sur certaines matrices alimentaires.
Flexibilité 2 à 4 pathogènes simultanément 1 pathogène à la fois Grâce à son degré d´automatisation supérieur, GeneQuence permet le dosage de 2 à 4 pathogènes simultanément. Des appareils multiples seraient nécessaires pour réaliser la même chose avec la PCR
Traitement 2 à 4 plaques de 96 puits simultanément 1 série de 96 échantillons en même temps Dès qu´une plaque est terminée, GeneQuence peut accepter une autre série d´échantillons. Avec les systèmes PCR, il est nécessaire d´attendre que la série soit complètement terminée avant de pouvoir en charger une autre. GeneQuence est compatible avec une opération en continu, sans interruption.
Technologie Hybridation d´acide nucléique PCR La polymérase thermostable utilisée dans la PCR connaìt des problèmes d´inhibition documentés causant des résultats faux négatifs avec certaines matrices. GeneQuence évite complètement ce problème en ayant recours à l´hybridation d´acides nucléiques. De plus, GeneQuence sonde la cible directement, plutôt qu´une séquence intermédiaire amplifiée à partir de la cible originale.
Cadence 1,32 échantillon par minute 0,46 échantillon par minute Avec une cadence augmentée de 187%, GeneQuence réduira le temps de rétention de vos inventaires.

Comparatif: GeneQuence et Tests ELISA

Point de Comparaison GeneQuence ELISA Les avantages de GeneQuence
Détection ARNr Protéine 1 000 à 10 000 copies d´ARNr par cellule confèrent à GeneQuence un niveau de sensibilité élevé.
Caractère inclusif Hybridation d´ADN ELISA Sandwich Permet la détection de tous les sérovars de Salmonella.
Cible pathogène ARNr Protéine L´ARN a une durée de vie très courte car constamment dégradé par les ARNases ubiquistes. Associé aux dilutions de l´enrichissement, GeneQuence ne détectera pas les bactéries mortes.
Procédure Manuelle ou automatisée Variabilité Certains systèmes ELISA requièrent l´utilisation d´un instrument. D´autres sont basés sur une méthode manuelle qui peut éventuellement être adaptée par l´utilisateur sur un système automatisé. De manière unique, GeneQuence permet à l´utilisateur d´effectuer le test manuellement ou par l´intermédiaire d´un automate.
Spécificité ADN : ARNr Anticorps : Protéine Avec GeneQuence, deux niveaux de stringence (liaison de l´ARNr cible à la sonde de capture, et de l´ARNr à la sonde de détection) permettent de réduire les taux de faux positifs.
Cadence DSX Autres plates-formes Le DSX peut traiter plus de 450 échantillons en une journée de 8 heures, soit plus du double que tout autre système ELISA sur le marché – réduisant vos coûts de main d´œuvre et d´équipement.


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